| Gentechnik | ||||
allgemeines |
Durch spezielle biochemische Techniken können Gene nachgewiesen, vermehrt, sequenziert und übertragen werden. | |||
| PCR | Polymerase-Kettenreaktion, Methode zur Vervielfältigung von DNA-Spuren. | |||
| Virus als Vektor auf Säugerzellen | z.B. SV40-Virus. Die ringförmige DNA wird aufgetrennt und mit dem zu übertragenden DNA-Strang vermischt. | Die Virus-DNA schließt den Ring und setzt das Ziel-Gen ein. | ||
| Das beladene Virus infiziert die Zielzellen. | ||||
| Die Virus-DNA mit dem Zielgen wird in die Zielzelle eingebaut. | ||||
| DNA-abhängiger Gentransfer auf Säugerzellen | Ziel - DNA wird mit einer Schrittmacher - DNA vermischt. | Ausfällung der DNA mit Ca - Phosphat. | ||
| Einbringung in eine Zellkultur. | ||||
| Selektion der transformierten Zellen. | ||||
| Plasmide zum Gentransfer auf Coli-Bakterien | Durch Übertragung von Genen auf Bakterien ist eine Massenproduktion der Gene oder des Genproduktes (z.B. Insulin) möglich. | Plasmid z.B. pBR322 überträgt Gene von einem Bakterium zum andern. | ||
| Beladung des Plasmids mit einem Ampicillin-Resistenzgen und dem Zielgen. | ||||
| Infektion von Coli-Bakterien mit dem Plasmid . | ||||
| Zusatz von Ampizillin: nur die infizierten Bakterien überleben . | ||||
| Plasmide zum Gentransfer auf Säugerzellen | Übertragung den Gens durch Plasmid auf Bakterien. | Massenvermehrung und Extraktion des Plasmids . | ||
| Injektion des Plasmids mit dem Zielgen in eine Säugerzelle. | ||||
| Gentransfer durch Hybridisierung | Fusion zweier Zellen. Stimulation durch inaktive Sendai - Viren oder Polyethylenglykol. | Ergebnis: zweikernige Zelle, Heterokaryon. | ||
| Zellteilung: ein Kern mit beiden Chromosomen. | ||||
| TALEN | Transcription activator-like effector nucleases | Nutzung zum gezielten Ausschalten von Genen (Knockout). | synthetische DNA-Scheren, die in den Zellkern eingeschleust an bestimmte Stellen der Erbsubstanz binden und dort Löcher hineinschneiden. Die Struktur der TALE-Proteine wurde bestimmten Bakterien abgeleitet, die Fäulniserkrankungen an Pflanzen auslösen. Die Mikroben schleusen TALE-Proteine in die Pflanzenzellen ein, um dort spezifische Erbgutabschnitte zu ihrem Vorteil zu regulieren(1). | |
| Crispr-Cas9 | ||||
| Quellen |
1.) Hornung V,et al.: A ligation-independent cloning technique for high-throughput assembly of transcription activator-like effector genes. Nature Biotechnology 2012, DOI: 10.1038/nbt.2460 | |||
Impressum Zuletzt geändert am 07.06.2015 7:05